蛋白组学分析-肽质量指纹谱技术
蛋白质组学是当前生命科学研究的前沿领域。对蛋白质快速、准确的鉴定是蛋白质组学研究中必不可少的关键性的一步。采用MALDI-TOF-MS测得肽质量指纹谱(PMF)在数据库中查询识别的方式鉴定蛋白质,是目前蛋白质组学研究中最普遍应用的最主要的鉴定方法。
iTRAQ
在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。而在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114~117)的峰,因此,根据波峰的高度及面积,可以得到蛋白质的定量信息。
修饰技术-泛素化Label Free标记定量
(一类低分子量的蛋白质)分子在一系列特殊的酶作用下,将细胞内的蛋白质分类,从中选出靶蛋白分子,并对靶蛋白进行特异性修饰的过程,与蛋白质降解和功能调控密切相关。泛素化在蛋白质的定位、代谢、功能、调节
相对定量蛋白质组学(Label Free)
非标记定量技术(Label Free)用来比较的样品不经过任何标记,直接酶解后经过质谱分析产生数据。Label Free技术减少了前处理过程中的样品损失,在肽段的检测和蛋白质覆盖率方面具有优势;
单一蛋白的高覆盖度分析
iTRAQ/TMT蛋白组定量分析 SILAC蛋白组定量分析 Label Free非标定量分析 半定量分析(spectral count) 鸟枪法蛋白全谱分析 2D蛋白胶点鉴定 单一蛋白高覆盖度分析
荧光差异凝胶电泳
荧光差异凝胶电泳技术基本实验线路是电泳前以Cy2、Cy3 和Cy5三种荧光染料分别标记蛋白质样品(其中包括一个蛋白质内标)。然后将标记好的蛋白质样品混合,在同一块胶上进行双向电泳。电泳结果分别用3种不同的激发波长得到不同颜色的荧光信号,根据这些信号的比例来判定样品之间蛋白质的差异,并且专用软件可全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准,保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。