3173 DNA聚合酶

3173 DNA聚合酶为来源于病毒的热稳定型DNA聚合酶，通过点突变修饰，使其3’-5’外切活性缺失（exo-形式）而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚合酶活性，还具有依赖于RNA的逆转录活性，因此可用于单管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性，可用于DNA或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中，可实现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板，可通过92℃加热3s来得到好的扩增效果，而Bst pol在此温度加热后导致扩增活性丧失。

3173 DNA聚合酶在95℃条件下的半衰期为20min，因此PCR的起始预变性时间通常为1~2min。该酶搭配两种Buffer：10×3173 Isothermal Buffer和5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer用于恒温PCR扩增，其反应温度不能超过70℃。5×Best PCR Buffer用于常规PCR扩增，94℃预变性时间不可超过5min。

产品特点：

• 同时具有较强的延伸能力和逆转录活性；
• 耐热性能极强，对于复杂模板的扩增活性强；
• 强烈的链置换活性，可应用于LAMP检测。

产品应用：

• 恒温PCR扩增；
• LAMP和RT-LAMP；
• 链置换基因合成；
• 在60-70℃之间具有反转录活性，可用于单管RT-PCR。

产品组成：

储存：-20℃可保存3年。

单位定义：
一个活力单位即在65℃条件下，30分钟内催化25nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

使用方法：

一、以DNA为模板进行PCR扩增

• 50μl反应体系配制：
  

  成分	用量
  3173 DNA Polymerase (5U/μl)	1μl
  5×Best PCR Buffer	10μl
  dNTP Mixture (2.5mM each)	4μl
  模板DNA	1ng~1μg
  上游引物（10μM）	5μl
  下游引物（10μM）	5μl
  ddH2O	Up to 50μl

• PCR扩增循环参数：
  

  循环数	温度	时间
  1st Cycle	90℃	2min
  25-40 Cycles	90℃	15s
  	Tm	15s
  	72℃	1kb/1min
  Last Cycle	72℃	5min

二、以RNA为模板进行RT-PCR扩增

• 50μl反应体系配制：
  

  成分	用量
  3173 DNA Polymerase (5U/μl)	1μl
  5×Best PCR Buffer	25μl
  dNTP Mixture (10mM each)	5μl
  模板RNA	10ng~1μg
  上游引物（10μM）	2μl
  下游引物（10μM）	2μl
  ddH2O	Up to 50μl

• PCR扩增循环参数：
  

  循环数	温度	时间
  1st Cycle	60℃	60min
  35 Cycles	90℃	15s
  	57℃	15s
  	72℃	1kb/1min
  Last Cycle	72℃	5min

三、缺刻恒温PCR扩增

• 50μl反应体系配制：
  

  成分	用量
  3173 DNA Polymerase (5U/μl)	1μl
  10×3173 Isothermal Buffer	5μl
  dNTP Mixture (10mM each)	5μl
  模板DNA	10ng~1μg
  引物（500μM）	5μl
  ddH2O	Up to 50μl

• 扩增程序：
  55℃孵育2~8h。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！