辅酶ⅡNADP(H)含量测定试剂盒
产品名称： 辅酶ⅡNADP(H)含量测定试剂盒
英文名称： CoenzymeⅡNAD(H) Content Assay Kit
产品编号： BC1100
产品价格： 0
产品产地： 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标： Solarbio
更新时间： 2024-11-25T13:52:06
使用范围： null
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产品内容：
酸性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
碱性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：基质缓冲液 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 4mL 双蒸水，混匀；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 4mL 双蒸水，混匀；
试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入 4mL 双蒸水，混匀；
试剂五：液体 1.8mL×1 支，4 ℃保存；
试剂六：液体 30mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂七：液体 50mL×1 瓶，4 ℃保存。
操作步骤：
一、NADP 和 NADPH 的提取：
1、血清（浆）中 NADP 和 NADPH 的提取：
NADP 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.9 mL 酸性提取液，煮沸 5min(盖紧)；冰浴冷却后，10000g 4℃ 离心 10min；取上清加入等体积碱性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.9 mL 碱性提取液，煮沸 5min,冰浴中冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清加入等体积酸性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NADP 和 NADPH 的提取：
NADP 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.9 mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清加入等体积碱性提取液混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。
NADPH 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.9 mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清加入等体积酸性提取液混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NADP 和 NADPH 的提取：
NADP 的提取：收集 400-500 万细胞或细菌，加入 0.9 mL 酸性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％或 200W， 超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液至另一 新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，冰上保存待测。
NADH 的提取：收集 400-500 万细胞或细菌，加入 0.9 mL 碱性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％或 200W， 超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液至另一 新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，冰上保存待测。
二、测定步骤(在 1.5mLEP 管中按下表依次加样）：
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试剂名称 |
测定孔(μL) |
|
样本 |
50 |
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双蒸水 |
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试剂一 |
250 |
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试剂二 |
75 |
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试剂三 |
75 |
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试剂四 |
75 |
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试剂五 |
35 |
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对照管可以只做一个，不需每一个样品都做对照。充分混匀后，室温避光静置 40min。 |
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试剂六 |
500 |
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充分混匀，静置 5min 后，20000g，4 ℃离心 5min，弃上清，沉淀中加入： |
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试剂七 |
1000 |
混匀， 570nm 下比色。
注意事项
1、若用比色皿测，沉淀用试剂七溶解后必须立即测。最好加一个测一个。
2、若用酶标板测，也必须在测定时再加试剂七，加入 1000μL 试剂七溶解沉淀，混匀后，取 300μL 至酶标板中， 立即测定。
3、不可将试剂一、二、三和四混合后再加，必须分开加。
NADP+含量的计算
1、血清（浆）中 NADP +含量计算
NADP +含量(μmol/mL）=（测定管 OD 值-0.047）×376
2、组织中 NADP+含量计算
(1) 按样本蛋白浓度计算 NADP + (μmol/g prot）= (测定管 OD 值-0.047)×37.6 ÷样本蛋白浓度（g/L）
(2) 按样本鲜重计算 NADP + (μmol/g mass）= (测定管 OD 值-0.047)×37.6 ÷样本鲜重（g/L）
3、细菌或细胞中 NADP+含量计算
（1）按样本蛋白浓度计算 NADP+ (μmol/g prot）= (测定管 OD 值-0.047)×37.6 ÷样本蛋白浓度（g/L）
(3) 按细菌或细胞密度计算 NADP+ (μmol/104 cell）= (测定管 OD 值-0.047)×37.6 ÷细菌或细胞（104 cell/L）
NADPH含量的计算
1、血清（浆）中 NADPH 含量计算
NADPH 含量(μmol/L）= (测定管 OD 值-0.047)×855
2、组织中 NADPH 含量计算
(1) 按样本蛋白浓度计算 NADPH (μmol/g prot）= (测定管 OD 值-0.047)×85.5 ÷样本蛋白浓度（g/L）
(2) 按样本鲜重计算 NADPH (μmol/g mass）= (测定管 OD 值-0.047)×85.5 ÷样本鲜重（g/L）
3、细菌或细胞中 NADPH 含量计算
(1) 按样本蛋白浓度计算 NADPH (μmol/g prot）= (测定管 OD 值-0.047)×85.5 ÷样本蛋白浓度（g/L）
(2)按细菌或细胞密度计算 NADPH (μmol/104 cell）= (测定管 OD 值-0.047)×85.5 ÷细菌或细胞（104 cell/L）
相关文献：
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809